Uno degli strumenti più essenziali in un laboratorio di microbiologia è lo sterilizzatore, con l'autoclave (sterilizzatore a vapore ad alta pressione) che è il più comunemente usato. Secondo GB 4789.1-2016, le attrezzature di laboratorio devono essere regolarmente ispezionate e/o calibrate (con tag di ispezione), mantenute e gestite per garantire le prestazioni adeguate e la sicurezza operativa. Ma la tua autoclave ha subito tali ispezioni? E se vuoi eseguire la verifica, come dovresti farlo? Oggi riassumeremo i metodi chiave per verificare l'efficacia della sterilizzazione delle autoclave.
La verifica dell'efficacia della sterilizzazione dell'autoclave include generalmente metodi come indicatore chimico, termometro massimo, tubo di temperatura autoprodotto e indicatore biologico. Sebbene questi metodi condividano principi simili, confermando principalmente se lo sterilizzatore raggiunge la temperatura richiesta durante la sterilizzazione, puoi scegliere uno o più in base alle condizioni specifiche del tuo laboratorio.
1. Metodo dell'indicatore chimico
Principio: gli indicatori chimici subiscono una variazione di colore o forma in condizioni specifiche di temperatura e tempo. Questa modifica viene utilizzata per determinare se i parametri di sterilizzazione sono stati soddisfatti.
Un oggetto comunemente usato nei laboratori è il nastro indicatore di autoclave 3M, che cambia colore dopo la sterilizzazione. Il nastro è realizzato in sostanze chimiche termosensibili, sviluppatori di colori e materiali di vernice, stampato in un motivo a strisce su nastro adesivo. Viene applicato direttamente all'esterno del pacchetto di sterilizzazione, con una lunghezza minima di 5 cm. Premere leggermente il nastro per garantire una buona adesione e sigillatura. Dopo essere stati esposti a 121 ° C per 20 minuti o 130 ° C per 4 minuti, le strisce bianche diagonali sul nastro dovrebbero diventare completamente nere. Se la modifica del colore è irregolare o incompleta, il pacchetto non è considerato correttamente sterilizzato.
2. Metodo massimo termometro
Principio: questo metodo utilizza un termometro a mercurio che non torna a una temperatura inferiore una volta riscaldata, simile a un termometro medico tradizionale. Indica la temperatura massima raggiunta durante la sterilizzazione.
Per la verifica, posizionare il termometro a mercurio all'interno di un pallone Erlenmeyer pieno d'acqua. Durante la sterilizzazione, posizionare il pallone nelle sezioni superiori e inferiori dell'autoclave. Dopo il processo, controlla se la lettura del termometro corrisponde alla temperatura richiesta. Questo metodo può solo verificare la temperatura e non può confermare se il requisito del tempo di sterilizzazione è stato soddisfatto, quindi rappresenta lo standard minimo per la verifica dell'autoclave.
3. Metodo del tubo di temperatura autoprodotto
Principio: questo metodo utilizza alcune sostanze chimiche che si sciolgono e si ricristalliano a temperature specifiche, con forme di cristallo distintive post-raffreddamento. Queste sostanze chimiche sono sigillate in piccoli tubi di vetro e posizionati all'interno dell'autoclave. Dopo la sterilizzazione, viene esaminata la forma del cristallo per determinare se è stata raggiunta la temperatura corretta.
L'acido benzoico è comunemente usato, con un punto di fusione di 121–123 ° C, che si allinea alla temperatura di sterilizzazione standard dell'autoclave. L'acido benzoico solido è sigillato in piccoli tubi di vetro e collocato nell'autoclave. Dopo la sterilizzazione, si osserva che lo stato dell'acido benzoico conferma se la temperatura target è stata raggiunta. Come il metodo massimo termometro, questo approccio verifica solo la temperatura, non la durata della sterilizzazione.
4. Metodo indicatore biologico
Principio: questo metodo utilizza spore non patogene di Geobacillus stearothermophilus come organismi indicatore per valutare l'efficacia della sterilizzazione termica. Queste spore sono altamente resistenti al calore, con resistenza simile a quella delle spore patogene di Clostridium botulinum, rendendole indicatori adatti per verificare l'efficacia della sterilizzazione.
In tre forme sono disponibili indicatori biologici: sospensioni di spore, strisce di spore e tubi integrati di spore e medio. Questi sono in genere posizionati in cinque posizioni nel contenitore di sterilizzazione: la parte anteriore, centrale e posteriore dello strato inferiore, nonché i punti centrali degli strati superiori e medi. Dopo la sterilizzazione, gli indicatori vengono inoculati in acqua bromocresol viola-glucosio-peptone e incubati a 55-60 ° C per 2-7 giorni. Se il mezzo rimane chiaro e invariato a colori, le spore sono state uccise, indicando una buona sterilizzazione. Se il mezzo diventa giallo e torbido, le spore sopravvissero, suggerendo scarse prestazioni di sterilizzazione. Sia le sospensioni di spore che le strisce di spore seguono lo stesso processo di validazione.
I tubi di indicatore biologico commerciale sono comunemente usati nei laboratori. Contengono spore di geobacillus stearothermophilus e un'ampoule di vetro sigillata con mezzo di crescita. I tubi sono posizionati in tutto il contenitore di sterilizzazione. Dopo l'autoclave, l'ampoule di vetro viene schiacciata per rilasciare il mezzo e il tubo viene incubato a 56 ° C, insieme a un controllo positivo. Se la sterilizzazione è inadeguata, le spore sopravvissute crescono e trasformerà il giallo del brodo. Se la sterilizzazione è efficace, le spore sono inattivate e il brodo rimane viola.
Frequenza di verifica
Attualmente, non esiste un rigoroso standard nazionale per quanto riguarda la frequenza della verifica dell'efficacia dell'autoclave. I laboratori dovrebbero stabilire i propri programmi di verifica e aderire rigorosamente a loro. Considerando sia la facilità d'uso che l'affidabilità dei risultati, si consiglia di utilizzare il nastro indicatore in combinazione con i tubi indicanti biologici, poiché offrono un semplice funzionamento e una verifica completa dell'efficacia della sterilizzazione.
Note sulla sterilizzazione (non richiesto per alcune autoclave completamente automatiche importate)
Quando si utilizza uno sterilizzatore a vapore ad alta pressione, è fondamentale espellere tutta l'aria fredda all'interno della camera quando viene rilasciato il vapore. Solo dopo che tutta l'aria fredda viene rimossa se la valvola di scarico fosse chiusa. Se rimane aria, l'indicatore di pressione può indicare la pressione corretta, ma la temperatura effettiva all'interno della camera non sarà all'altezza. Più aria trattenuta, maggiore è la discrepanza tra pressione e temperatura, potenzialmente con conseguente sterilizzazione incompleta. (Questo è spesso osservato durante la sterilizzazione dei supporti di fermentazione, dove le bolle d'aria rimangono in piccoli tubi di guida - che estendono l'aria fredda in modo più approfondito.)
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